دوره 8، شماره 31 و 32 - ( 6-1378 )
جلد 8 شماره 31 و 32 صفحات 19-14 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
. Hajia M. Effect of Lowering PCR Reaction Volumes and Increasing the Speed of DNA Amplification on the Sensitivity of PCR. JGUMS 1999; 8 (31 and 32) :14-19
URL: http://journal.gums.ac.ir/article-1-1970-fa.html
URL: http://journal.gums.ac.ir/article-1-1970-fa.html
حاجیا دکتر مسعود. تأثیر کاهش حجم مخلوط واکنشی و افزایش سرعت آمپلیفیکاسیون DNA بر روی حساسیت تکنیک واکنش زنجیره پلیمراز. مجله علوم پزشکی گیلان. 1378; 8 (31 و 32) :14-19
تأثیر کاهش حجم مخلوط واکنشی و افزایش سرعت آمپلیفیکاسیون DNA بر روی حساسیت تکنیک واکنش زنجیره پلیمراز
استادیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی همدان
چکیده: (2273 مشاهده)
چکیده
در سالهای اخیر با وجود آنکه گزارش‌های رضایتبخش در بکارگیری PCR جهت تشخیص عفونتهای کلینیکی ارائه گردیده، معهدا این تکنیک هنوز نتوانسته بواسطه مشکلاتی نظیر هزینه بالا به آزمایشگاه تشخیصی راه پیدا نماید. معرفی PCR سریع در حجم‌اند و با استفاده از ترموسیکارهای مخصوص، سبب افزایش سرعت و کاهش میزان مواد مصرفی گردیده است. اما بکارگیری آن مستلزم برخورداری از دستگاهها و امکانات بخصوص بوده و در نتیجه نیازمند یک سرمایه گذاری اضافی برای آزمایشگاهها میباشد. در این مطالعه کاهش حجم مخلوط واکنشی با هدف افزایش سرعت و تقلیل هزینه مواد مصرفی با استفاده از ترموسیکلرهای معمولی و وسایل روتین آزمایشگاه مورد مطالعه قرار گرفت.
در این بررسی DNA مایکوپلاسما پنومونیه پس از تحت تأثیر قرار گرفتن با پروتئیناز K، با روش فنل کلروفرم خالص گردید. آزمایش PCR در حجم‌های متفاوت و برنانه‌های گوناگون انجام پذیرفت و محصول بدست آمده با ژل آگارز الکتروفرز آنالیز گردید.
نتایج حاصله در طی آزمایشات متعدد با حجم‌های متفاوت و برنامه‌های گوناگون لازم برای یک سیکل تکثیر تأیید نمود که حجم مخلوط واکنشی در لوله‌های معمولی آزمایش (ependorff) از ul ۱۰۰ به ul ۱۰ و همچنین زمان مورد نیاز از 5/6 دقیقه به 5/3 دقیقه برای هر سیکل تکثیر قابل کاهش بوده، بدون آنکه حساسیت تست کاسته گردد. در مرحله بعدی به منظور اطمینان از حساسیت شرایط جدید تست، روش مذکور با نمونه‌های کلینیکی که در حالت اصلی دارای نتیجه مثبت بودند مورد آزمایش قرار گرفت. کلیه نتایج حاصله نشان داد که تمامی نمونه‌های مثبت در حالت اصلی در حالت جدید نیز دارای نتایج مثبت بودند.
انجام PCR در حجم‌های اندک، نه تنها سبب تقلیل هزینه انجام تست به میزان قابل توجهی میگردد بلکه میتواند سرعت انجام آمپلیفیکاسیون را به دو برابر افزایش دهد.
در سالهای اخیر با وجود آنکه گزارش‌های رضایتبخش در بکارگیری PCR جهت تشخیص عفونتهای کلینیکی ارائه گردیده، معهدا این تکنیک هنوز نتوانسته بواسطه مشکلاتی نظیر هزینه بالا به آزمایشگاه تشخیصی راه پیدا نماید. معرفی PCR سریع در حجم‌اند و با استفاده از ترموسیکارهای مخصوص، سبب افزایش سرعت و کاهش میزان مواد مصرفی گردیده است. اما بکارگیری آن مستلزم برخورداری از دستگاهها و امکانات بخصوص بوده و در نتیجه نیازمند یک سرمایه گذاری اضافی برای آزمایشگاهها میباشد. در این مطالعه کاهش حجم مخلوط واکنشی با هدف افزایش سرعت و تقلیل هزینه مواد مصرفی با استفاده از ترموسیکلرهای معمولی و وسایل روتین آزمایشگاه مورد مطالعه قرار گرفت.
در این بررسی DNA مایکوپلاسما پنومونیه پس از تحت تأثیر قرار گرفتن با پروتئیناز K، با روش فنل کلروفرم خالص گردید. آزمایش PCR در حجم‌های متفاوت و برنانه‌های گوناگون انجام پذیرفت و محصول بدست آمده با ژل آگارز الکتروفرز آنالیز گردید.
نتایج حاصله در طی آزمایشات متعدد با حجم‌های متفاوت و برنامه‌های گوناگون لازم برای یک سیکل تکثیر تأیید نمود که حجم مخلوط واکنشی در لوله‌های معمولی آزمایش (ependorff) از ul ۱۰۰ به ul ۱۰ و همچنین زمان مورد نیاز از 5/6 دقیقه به 5/3 دقیقه برای هر سیکل تکثیر قابل کاهش بوده، بدون آنکه حساسیت تست کاسته گردد. در مرحله بعدی به منظور اطمینان از حساسیت شرایط جدید تست، روش مذکور با نمونه‌های کلینیکی که در حالت اصلی دارای نتیجه مثبت بودند مورد آزمایش قرار گرفت. کلیه نتایج حاصله نشان داد که تمامی نمونه‌های مثبت در حالت اصلی در حالت جدید نیز دارای نتایج مثبت بودند.
انجام PCR در حجم‌های اندک، نه تنها سبب تقلیل هزینه انجام تست به میزان قابل توجهی میگردد بلکه میتواند سرعت انجام آمپلیفیکاسیون را به دو برابر افزایش دهد.
واژه‌های کلیدی: تشخیص / مایکوپلاسما پنومونیه / واکنش زنجیره پلیمرها
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
تمامی آثار مجله دانشگاه علوم پزشکی گیلان تحت مجوز
Creative Commons
Attribution-NonCommercial 4.0 است.
تماس با ما
کد پستی : 93345-41938
تلفن نمابر: 0133330939
وبسایت: http://journal.gums.ac.irو ایمیل: medjour@gums.ac.ir
